Investigadores de la USP producen coronavirus en el laboratorio
Elton Alisson | Agência FAPESP – Investigadores del Instituto de Ciencias Biomédicas de la Universidad de São Paulo (ICB-USP) pudieron aislar y cultivar en el laboratorio el coronavirus SARS-CoV-2 obtenido de los primeros dos pacientes brasileños diagnosticados con la enfermedad en el Hospital Israelita Albert Einstein.
Los virus se distribuirán a grupos de investigación y laboratorios clínicos públicos y privados en todo el país con el objetivo de expandir la capacidad de llevar a cabo pruebas de diagnóstico y adelantar estudios sobre cómo se causa y se propaga la enfermedad.
«La disponibilidad de muestras de este virus cultivadas en células permitirá a los laboratorios clínicos tener controles positivos para validar las pruebas de diagnóstico, a fin de garantizar que realmente funcionen», dijo Edison Luiz Durigon , profesor de ICB-USP y coordinador de proyectos de la Agencia FAPESP. , con el apoyo de FAPESP.
Según el investigador, la falta de estas muestras de virus para ser utilizadas como controles positivos fue uno de los factores que limitó el diagnóstico de coronavirus en Brasil.
A medida que el SARS-CoV-2 apareció en el extranjero, las muestras de virus que se han utilizado como control positivo en las técnicas de diagnóstico utilizadas por los laboratorios brasileños al comienzo del brote en el país se importan de Europa y los Estados Unidos, a un costo que varía entre R $ 12 mil y R $ 14 mil.
Por lo tanto, el diagnóstico de casos de la enfermedad en el país ha sido realizado principalmente por laboratorios privados y laboratorios de referencia en el sector público que han recibido casos sospechosos.
En la red pública, cuatro laboratorios nacionales de referencia actualmente realizan las pruebas: Instituto Adolfo Lutz, en São Paulo; Instituto Evandro Chagas, en Pará; Fiocruz, en Río de Janeiro; y el Laboratorio Central de Goiás, que fue entrenado para realizar el examen específico de coronavirus de brasileños repatriados desde China.
La primera prueba fue realizada por los hospitales de referencia en cada estado y el material recolectado se envió a uno de estos cuatro laboratorios para su control.
“Los virus que pudimos cultivar en el laboratorio podrían usarse en un kit de diagnóstico que el Ministerio de Salud distribuirá a los Laboratorios Centrales de Salud Pública [Lacens] en todo el país. Con eso, todos los estados podrán llevar a cabo el diagnóstico ”, dijo Durigon.
Los virus se distribuirán a laboratorios clínicos inactivados, es decir, sin la capacidad de infectar células y a temperatura ambiente. Los virus importados hoy por los laboratorios brasileños tienen que ser transportados bajo refrigeración, en hielo seco, lo que hace que el flete sea mucho más caro, explicó el investigador.
Los laboratorios clínicos recibirán alícuotas de aproximadamente 1 mililitro (ml) de virus inactivado. El ácido nucleico de estas muestras se extraerá y utilizará como control positivo en un examen basado en la técnica conocida como PCR (reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real).
Esta técnica permite amplificar el genoma del virus en una muestra clínica, aumentando en millones el número de copias del ARN del coronavirus. De esta manera, es posible detectarlo y cuantificarlo en una muestra clínica.
“La PCR permite que el diagnóstico se realice en hasta cuatro horas. Pero todavía hay pocos laboratorios en el país que tengan el equipo disponible ”, dijo Durigon.
Para superar esta limitación, los investigadores también tienen la intención de desarrollar otras pruebas de diagnóstico basadas en otras técnicas más accesibles, como el análisis de inmunofluorescencia, un método que permite la visualización de antígenos en una muestra mediante tintes fluorescentes.
«Si podemos validar una prueba de este tipo específico para el coronavirus, sería posible que otros laboratorios y hospitales que no tienen el equipo para el examen RT-PCR también hagan un diagnóstico», evaluó Durigon.
El legado del zika
Según el investigador, el aislamiento y la reproducción del coronavirus en el laboratorio fueron posibles gracias a los recursos obtenidos de FAPESP para la instalación en el ICB-USP de dos laboratorios de bioseguridad de nivel 3, destinados a la manipulación de agentes con el potencial de causar enfermedades graves o infección letal La infraestructura fue creada inicialmente para el cultivo del virus Zika.
La construcción de estos laboratorios a principios de 2016, en el apogeo de la epidemia del virus Zika en el país, ahora ha permitido el cultivo no solo del coronavirus, sino también de la gripe (que causa la gripe) y otros, para avanzar en el diagnóstico de virus. países emergentes, dijo Durigon.
“Cuando hubo un brote de Zika, a fines de 2015, nos sorprendimos y logramos, con recursos de FAPESP, ser también los primeros en aislarlo y cultivarlo en el laboratorio para ponerlo a disposición de laboratorios y grupos de investigación.
A través de un proyecto llamado «Genome Virus», también respaldado por FAPESP, iniciado en 2003, fue posible formar y capacitar una red de 18 laboratorios en el Estado de São Paulo para diagnosticar virus respiratorios mediante RT-PCR y secuenciación del genoma.
Con el advenimiento del virus Zika, la red se activó y permitió el progreso en el diagnóstico y la comprensión de la enfermedad en el país, dijo Durigon.
“Por eso es importante la financiación continua para la investigación. Debido a las inversiones realizadas en el pasado, existe una infraestructura de investigación en São Paulo que nos permitirá responder más rápidamente a las demandas, sin dejar cero ”, dijo. El grupo de investigación de la USP ha estado monitoreando la circulación estacional de otros cuatro coronavirus en el país. Los resultados de los estudios indicaron que la circulación se produce principalmente en invierno.
«Es probable que São Paulo y Rio Grande do Sul tengan un mayor número de casos de infección en el invierno porque son los estados más fríos», dijo Durigon.